A high throughput method for screen

A high throughput method for screening cDNA libraries has been developed to identify putativeantimicrobial peptides (AMPs). It is based on a rapid dye inclusion assay for assessing antagonism ofbacterial viability. Colonies are grown on a membrane on a permissive medium until full colony size isreached. The membrane, supporting the array of colonies, is transferred onto an inductive mediumcontaining a vital dye. Upon expression of any antagonizing peptides, the cell membrane becomescompromised allowing dye infusion to permit visual identification of deleterious peptides.Our approach was validated by screening a synthetic oligonucleotide library expressed in Escherichia coli. Arandom oligonucleotide library, containing inserts of up to 75 nucleotides in length was constructed andexpressed in E. coli. From a potential pool of 100 000 peptides, in a single round of screening, three werefound to be antimicrobial: L1, L3, and L8. Peptide L1 was shown to have a concentration-dependentbactericidal effect against Gram-negative E. coli and moderate biostatic activity against the Gram-positivebacteria Listeria monocytogenes. L8 was found to have bacteriostatic, and possibly bactericidal effect againstE. coli, Pseudomonas aeruginosa and Salmonella typhimurium. These results validated this high throughputAMP identification assay based on filter bound colony array libraries and vital dye inclusion.

結果 (繁體中文) 1:

用於篩選cDNA文庫的高通量方法已經開發出來，鑑定推定的
抗微生物肽（AMP）。它是基於快速染料列入法評估的拮抗
細菌存活。菌落生長在膜上的許可介質上，直到全菌落大小
達到。的膜，支撐菌落的陣列，被轉印到感應介質
含有活體染料。一旦任何拮抗肽的表達，細胞膜變得
受損允許染料輸注以允許有害肽的視覺識別。
我們的方法是通過篩選在大腸桿菌中表達的合成寡核苷酸庫驗證。一種
隨機寡核苷酸文庫，含有最大長度為75個核苷酸的插入物被構造和
在大腸桿菌中表達。從100 000肽的潛在的池，在單輪篩選，三個被
發現是抗微生物：L1，L3，和L8。肽L1顯示出具有濃度依賴性的
抗革蘭氏陰性的大腸桿菌的殺菌作用和中度抑制生物活性對抗革蘭氏陽性
菌的李斯特菌。L8被發現有抑菌，以及對可能的殺菌作用
大腸桿菌，銅綠假單胞菌和鼠傷寒沙門氏菌。這些結果驗證了這種高通量
基於過濾器結合的菌落陣列庫和活體染料包含AMP識別測定。

結果 (繁體中文) 2:

開發一種用於篩選 cDNA 庫的高通量方法，用於識別假定
抗菌肽（AmPS）。它基於快速染料內含測定，用於評估
細菌的生存能力。殖民地生長在膜上，在允許的介質上，直到完全的殖民地大小
達到。膜，支援菌落陣列，被轉移到電感介質上
含有重要的染料。當任何對抗肽的表達，細胞膜成為
妥協允許染料注入，以允許視覺識別有害肽。
我們的方法通過篩選在大腸桿菌中表達的合成寡核苷酸庫得到了驗證。A
隨機寡核苷酸庫，包含長度高達75個核苷酸的插入物，
以大腸桿菌表示。從10萬肽的潛在池中，在一輪篩選中，三個
發現抗菌：L1、L3和L8。肽 L1 被證明具有濃度依賴性
對革蘭氏陰性大腸桿菌的殺菌作用和中度生物靜殺活性對革蘭氏陽性
細菌李斯特菌單細胞基因。L8被發現有殺菌，並可能殺菌效果對
大腸桿菌、假單一菌周和沙門氏菌。這些結果驗證了這種高輸送量
基於篩檢程式邊界菌群陣列庫和重要染料內含的AMP識別測定。

結果 (繁體中文) 3:

本文提出了一種高通量篩選cDNA文庫的方法
抗菌肽（AMPs）。它是基於一種快速的染料包合試驗來評估
細菌活力。菌落生長在允許培養基上的膜上，直到菌落完全變大
達到。支撐菌落陣列的膜被轉移到一種誘導培養基上
含有重要染料的。當任何拮抗肽表達時，細胞膜變成
允許染料注入以允許有害肽的視覺識別。
通過篩選在大腸桿菌中表達的合成寡核苷酸文庫，驗證了我們的方法。一個
隨機的寡核苷酸文庫，包含長度高達75個核苷酸的插入物
在大腸桿菌中表達。在一輪篩選中，來自10萬個潜在肽庫的3個
發現有抗菌作用：L1、L3和L8。肽L1具有濃度依賴性
對革蘭氏陰性大腸桿菌的殺菌作用及對革蘭氏陽性菌的中等生物活性
單核細胞增生李斯特菌。發現L8具有抑菌作用，並可能對
E、大腸桿菌、銅綠假單胞菌和鼠傷寒沙門氏菌。這些結果驗證了這種高輸送量
基於濾過結合菌落陣列文庫和活性染料包合物的AMP鑒定方法。