Serum-free Medium Increases and Ins

Serum-free Medium Increases and Insulin Decreases RDH10mRNA Stability—We determined the elimination half-life (t1⁄2)of RDH10 mRNA in cells cultured 16 h in serum-free medium,or maintained in growth medium, and then exposed to ActD for24 h (Fig. 5A). RDH10 mRNA had a t1⁄2 of 35 h in the absence ofserum and insulin. In the absence of serum, but in the presenceof insulin, the t1⁄2 decreased to 19 h. In the presence of serum andabsence of insulin (growth medium), RDH10 mRNA had abiphasic t1⁄2. The mRNA was decreased 50% by 8 h; after 8 h themRNAwas stabilized with a t1⁄2 of 118 h. Adding serum for 8 h tocells exposed to serum-free medium for 16 h also decreased theamount of RDH10 mRNA by 50%. Because RDH10 expressionis elevated 2–3-fold in serum-free medium, the amounts ofmessage in cells with serum-free medium, with or without insulin,continued to exceed those of cells maintained in growthmedium. Destabilization of RDH10 mRNA by insulin wasattenuated by inhibition of PI3K or expression of dnFoxO1, andcompletely prevented by inhibition of Akt (Fig. 5B). In theabsence of ActD, RDH10 expression in cells exposed to serumfreemedium 16 h, then treated 4 h with insulin, was notchanged significantly (Fig. 5C). In contrast, treatment withserum or serum and insulin reduced RDH10 mRNA to theamount in growth medium. These data show that mRNAinduced by long-term exposure to serum-free medium is moresensitive to serum than insulin. In cells exposed to serum-freemedium for 16 h, then treated 8 h with CHX and ActD versusActD alone, maximum RDH10 mRNA stability required translation(Fig. 5D).

結果 (繁體中文) 1:

無血清培養基中增加與胰島素跌幅RDH10
mRNA的穩定性，我們確定了消除半衰期（t1/2）
RDH10 mRNA的細胞在無血清培養基中培養16小時，
或維持在生長培養基中，然後暴露於放線菌素D對
24小時（圖5A）。RDH10的mRNA具有35 h的t1/2在缺乏
血清和胰島素。在無血清的，但在存在
的胰島素，所述t1/2降低至19小時。在血清的存在和
不存在胰島素（生長培養基）的，RDH10的mRNA有
雙相t1/2。的mRNA的8小時減少50％; 8小時後，將
mRNAwas穩定化的118 h的t1/2。加入血清8小時，以
暴露於無血清培養基中16小時的細胞也降低了
由50％的量的RDH10 mRNA的產生。因為RDH10表達
在無血清培養基中升高2-3倍，的量
與無血清培養基中，有或無胰島素的細胞信息，
繼續超過那些保持在生長的細胞的
平台。由胰島素RDH10 mRNA的去穩定化是
通過PI3K的抑制或表達dnFoxO1的衰減，並
通過抑制Akt的（圖5B）的完全防止。在
不存在放線菌素D，在暴露於無血清細胞RDH10表達的
介質16小時，然後處理與胰島素4小時，沒有
顯著變化（圖5C）。相反，用治療
血清或血清和胰島素降低RDH10的mRNA的
在生長培養基中的量。這些數據表明，基因
誘導長期暴露於無血清培養基是更
血清比胰島素敏感。在暴露於無血清細胞
培養基中16小時，然後進行處理8小時以CHX和用ActD對
單獨用ActD，最大RDH10 mRNA的穩定性所需的翻譯
（圖5D）。

結果 (繁體中文) 2:

無血清介質增加和胰島素減少 RDH10
mRNA 穩定性 — 我們確定了消除半壽命 （t1⁄2）
在無血清培養基培養16h的細胞中，RDH10 mRNA的RDH10 mRNA，
或保持在增長介質，然後暴露于ActD
24 小時（圖 5A）。RDH10 mRNA 的 t1⁄2 為 35 h，在沒有
血清和胰島素。在沒有血清的情況下，但在存在
胰島素，t1⁄2降至19小時。在血清和
缺乏胰島素（生長介質），RDH10 mRNA有一個
雙相t1⁄2。mRNA 減少 50% 8 小時;8小時後
mRNA 穩定在 t1⁄2 的 118 h. 添加血清 8 h 到
暴露于無血清培養基的細胞16小時也減少了
RDH10 mRNA的量50%。因為 RDH10 運算式
在無血清培養基中升高2~3倍，
在無血清介質的細胞中，無論是否使用胰島素，
繼續超過在生長中維持的細胞
中。RDH10 mRNA通過胰島素不穩定
通過抑制 PI3K 或表達 dnFoxO1 衰減，以及
完全防止通過抑制Akt（圖5B）。在
在暴露于無血清細胞中缺乏ActD、RDH10表達
中等16小時，然後用胰島素治療4小時，不
顯著變化（圖 5C）。相反，治療與
血清或血清和胰島素將RDH10 mRNA降低到
增長介質中的數量。這些資料表明，mRNA
長期接觸無血清介質引起的是
對血清比胰島素敏感。在暴露于無血清的細胞中
培養基為 16 小時，然後用 CHX 和 ActD 處理 8 小時
單獨作用，最大 RDH10 mRNA 穩定性要求翻譯
（圖 5D）。

結果 (繁體中文) 3:

無血清培養基新增，胰島素降低RDH10
我們測定了消除半衰期（t1/2）的信使核糖核酸穩定性
在無血清培養基中培養16h的細胞中RDH10mRNA的表達，
或在生長培養基中保存，然後暴露於ActD
24小時（圖5A）。RDH10mRNA在缺乏
血清和胰島素。在沒有血清的情况下，但在有血清的情况下
在有血清和
缺乏胰島素（生長培養基），RDH10mRNA有
雙相t1/2。8h時mRNA下降50%；8h後
用118 h的t1/2穩定MRNA。加入血清8 h
細胞在無血清培養基中暴露16小時也會降低
RDH10mRNA含量新增50%。因為RDH10運算式
在無血清培養基中升高2-3倍
無血清培養基細胞中的資訊，有或沒有胰島素，
繼續超過保持生長的細胞
中等。胰島素對RDH10 mRNA的失穩作用
通過抑制PI3K或dnFoxO1的表達而减弱，以及
完全通過抑制Akt來預防（圖5B）。在
無血清暴露的細胞中ActD、RDH10的表達缺失
培養16小時，然後用胰島素治療4小時，沒有
顯著改變（圖5C）。相反，治療
血清或血清及胰島素降低RDH10 mRNA至
生長培養基中的量。這些資料顯示
長期接觸無血清培養基引起的
對血清比胰島素敏感。暴露於無血清的細胞內
培養基16h，然後用CHX和ActD處理8h
單用ActD，最大RDH10 mRNA穩定性需要翻譯
（圖5D）。