The IVT dsRNA was synthesized in vi

The IVT dsRNA was synthesized in vitro using an E. coli T7 polymerase produced by expression in BL21 (Rosetta2) competent
cells and purified using His-SELECT-HF (Sigma, St. Louis, MO). A
plasmid containing the DvSnf7 sequence was linearized with a
restriction enzyme that cut at the end of the DvSnf7 transcript and
used in an in vitro transcription reaction containing 32 mM MgCl2,
10 mM DTT, 200 mM each ATP, CTP, GTP and UTP, 10 U/ml IPP,
0.05 mg/ml T7 polymerase and 5% DMSO to produce a 968 nucleotide RNA. Following transcription, the RNA was heated to ~70
C
and then allowed to cool at room temperature ensuring the
inverted repeats contained within the RNA were annealed to each
other and form a hairpin loop. This dsRNA was treated with DNase
to remove any remaining plasmid and purified using phenol:-
chloroform. The pellet was resuspended in UltraPure Water (Life
Technologies, Grand Island, NY), quantified using a NanoDrop
spectrophotometer, and stored at e 80
C.

結果 (繁體中文) 1:

IVT 雙鏈 Rna 合成體外使用由在 BL21 中表達大腸桿菌 T7 聚合酶 (Rosetta2) 主管細胞和純化使用他-選擇-HF (西格瑪，聖 Louis，MO)。A質粒 DvSnf7 序列線性化限制性內切酶切 DvSnf7 成績單末尾和用於包含 32 毫米 MgCl2，體外轉錄反應10 毫米 DTT，200 毫米每個 ATP、 GTP、 CTP utp 纜線，10 U/ml IPP，0.05 毫克/毫升 T7 聚合酶和 5%二甲基亞碸生產 968 核苷酸 RNA。後轉錄，RNA 被加熱到 70 ~然後讓其在室溫下確保冷卻包含在 RNA 的倒立的重複了退火到每個其他，形成一個髮夾環。這雙鏈 Rna 被治療頭要刪除任何剩餘的質粒純化利用苯酚:-氯仿。小球被用純水 (生活採用 NanoDrop 技術，格蘭德艾蘭，NY)，量化分光光度計，並存儲在 e 80 攝氏度。

結果 (繁體中文) 2:

IVT中的dsRNA在體外合成使用由表達在BL21（Rosetta2）主管產生的大腸桿菌T7聚合酶
的細胞和使用的His-SELECT-HF（Sigma公司，聖路易斯，密蘇里州）純化。甲
含有DvSnf7序列質粒線性化用
限制酶切割的DvSnf7轉錄的結束和
在含有32毫氯化鎂，在體外轉錄反應中使用
的10mM DTT，200mM的每種ATP，CTP，GTP和雙絞線，10 U / ml的
IPP，0.05 毫克/毫升T7聚合酶和5％DMSO中以產生968個核苷酸的RNA。以下轉錄，將RNA溶液加熱至〜70 4
C，然後使其在室溫下冷卻保證了
包含核糖核酸內反向重複退火到每個
其他並形成髮夾環。這個雙鏈RNA用DNA酶處理
以去除任何剩餘的質粒，並使用苯酚純化： -
氯仿。將沉澱再懸浮於超純水（生命
技術，格蘭德島，NY）中，使用NanoDrop量化
分光光度計，並儲存在È80℃。

結果 (繁體中文) 3:

利用大腸桿菌BL21表達T7 RNA聚合酶的產生在體外合成的dsRNA（IVT Rosetta2）首長
細胞和用他的選擇HF純化（Sigma，St.路易士，MO）。一個
質粒線性化dvsnf7序列與
限制酶切割用的體外轉錄反應中含有32 mM MgCl2的dvsnf7成績單和
結束，
10毫米DTT，200毫米ATP、CTP，GTP和UTP、10 U/ml IPP，
0.05毫克/毫升的T7 RNA聚合酶和5% DMSO產生一個968個核苷酸的RNA。以下轉錄，RNA被加熱到70 C ~

然後冷卻室溫保證
反向重複序列中包含的每個
RNA退火等形成的髮夾環。這是
dsRNA DNase處理除去任何殘留的質粒，並用苯酚-氯仿。該顆粒是懸浮在超純水（生活
科技，格蘭德島，紐約），使用Nanodrop
分光光度計量化，並存儲在80
C.