Our findings predict that through c

Our findings predict that through control of CtIP levels, the C terminus of Mre11 regulates the ability of cells to repair DSBs by homologous recombination. We therefore determined the impact on DSB repair of Mre11 alleles that disrupt CDK2 interaction and cause low CTIP levels. First, we examined repair of a chromosomal DSB by the homologous recombination pathway using a single inte¬grated copy of the DR-GFP reporter plasmid41. This construct con¬tains a GFP gene inactivated by insertion of the I-SceI endonuclease recognition site (Fig. 5a). GFP is reconstructed only after the I-SceI–induced DSB is repaired by homologous recombination, during which an adjacent GFP fragment is used as a template to restore missing sequences. We observed that Mre11C54 and Mre11ATLD1 each caused significant defects relative to control (P < 0.05 for both) (Fig. 5a). Even the short 13-residue deletion caused a similar defect (P < 0.05 for both) (Fig. 5a).
To address the possibility that disruption of the Mre11 C terminus causes an homologous recombination defect for reasons other than CtIP deficiency, we complemented CtIP through forced overexpres¬sion. We transfected Mre11WT or Mre11ATLD1 cells containing the DR-GFP reporter with exogenous murine CtIP using the pSport6-CMV expression plasmid. Indeed, CtIP expression caused a significant increase in homologous recombination in Mre11ATLD1 cells but did not increase homologous recombination above normal in cells expressing wild-type Mre11 (P < 0.05) (Fig. 5b).

結果 (繁體中文) 1:

我們的研究結果預測的 CtIP 級別的控制，通過 Mre11 的 C 總站調節細胞通過同源重組修復雙鏈斷裂的能力。因此，我們決心對 DSB 修復 Mre11 等位基因，破壞 CDK2 相互作用，並引起低 CTIP 水準的影響。首先，我們檢查修復染色體 DSB 通過同源重組途徑使用博士 GFP 記者 plasmid41 單 inte¬grated 副本。此構造 con¬tains 通過插入-SceI 核酸內切酶識別位點 (圖 5a) 滅活的綠色螢光蛋白基因。GFP 被重建只後我 SceI — — 致 DSB 修復通過同源重組，其間連續的綠色螢光蛋白片段可作為範本來恢復丟失的序列。我們觀察到，Mre11C54 和 Mre11ATLD1 造成相對於控制項的重大缺陷 (P < 0.05 為兩個) (圖 5a)。甚至短 13 殘留刪除造成類似的缺陷 (P < 0.05 為兩個) (圖 5a)。為了解決可能性的 Mre11 C 總站的中斷會導致同源重組缺陷以外 CtIP 不足的原因，我們通過強迫 overexpres¬sion 補充 CtIP。我們轉染 Mre11WT 或 Mre11ATLD1 細胞博士 gfp 含外源小鼠 CtIP 使用 pSport6-巨細胞病毒表達質粒。事實上，CtIP 表達顯著增加導致在 Mre11ATLD1 細胞中的同源重組，但不是會增加高於正常細胞表達野生型 Mre11 同源重組 (P < 0.05) (圖 5b)。

結果 (繁體中文) 2:

我們的研究結果預測，通過CtIP水平的控制，MRE11的C端調節細胞通過同源重組修復DNA雙鏈斷裂的能力。因此，我們決定於DSB修復MRE11等位基因擾亂CDK2相互作用並引起低CTIP水平的影響。首先，我們使用DR-GFP記者plasmid41單inte¬grated副本檢查修復染色體DSB通過同源重組途徑。該構建con¬tains一個GFP基因通過插入的I-SceI位核酸內切酶識別位點（圖5a）的失活。GFP被重建後，才在I-SceI位誘導的DSB被同源重組，在此期間，與相鄰的GFP片段用作模板來恢復丟失的序列修復。我們觀察到，Mre11C54和Mre11ATLD1每造成相對於對照顯著缺陷（P <0.05為兩者）（圖5a）。即使短暫的13個殘基的缺失導致了類似的缺陷（P <0.05為兩者）（圖5a）。
為了解決該MRE11 C末端的破壞導致以外的原因CtIP缺乏其它的同源重組缺陷的可能性，我們補充CtIP通過強制overexpres¬sion。我們轉染含有DR-GFP記者使用外源性鼠CtIP的pSport6-CMV表達質粒Mre11WT或Mre11ATLD1細胞。的確，CtIP表達引起Mre11ATLD1細胞同源重組顯著增加，但並沒有增加同源重組高於正常的細胞中表達野生型MRE11（P <0.05）（圖5b）。

結果 (繁體中文) 3:

我們的研究結果預測，通過資訊平臺水准控制，Mre11基因的C末端調節細胞通過同源重組修復DNA雙鏈斷裂的能力。囙此我們决定對MRE11基因破壞CDK2相互作用和導致低CtIP水准DSB修復的影響。首先我們研究了染色體DNA雙鏈斷裂修復通過使用一個單一的綜合¬同源重組途徑磨碎的副本的dr-gfp記者plasmid41。這¬構建含有GFP基因的I-SCEI核酸內切酶識別位點插入滅活（圖5A）。GFP是僅次於I-SCEI–誘導的DSB通過同源重組修復重建，在其中一個相鄰的綠色螢光蛋白片段被用作範本，以恢復遺失的序列。我們觀察到，mre11c54和mre11atld1每個造成重大缺陷相對於對照（P＜0.05）（圖5A）。即使短暫的13個殘基的缺失造成了類似的一種缺陷（P＜0.05）（圖5A）。
針對C端的中斷原因發生同源重組缺陷以外的CTIP不足的原因的可能性，我們可通過強制表達CtIP¬錫安。我們將mre11wt或mre11atld1細胞含有dr-gfp記者與外源性小鼠CtIP使用psport6 CMV表達質粒。確實CTIP表達引起mre11atld1細胞同源重組的顯著增加，但沒有新增同源重組表達野生型細胞高於正常MRE11（P＜0.05）（圖5b）。