Assay of B16F10 intracellular tyros

Assay of B16F10 intracellular tyrosinase activity
Cellular tyrosinase activity was determined as described
previously [34] with slight modifications. Briefly, the cells
were treated with α-MSH (100 nM) for 24 h, and then
intracellular tyrosinase activity was measured after treatment
with various concentrations of M. grandiflora L.
flower extract (final concentration 10, 15, 20%; v/v) or
arbutin (2.0 mM) for 24 h. After these treatments, the
cells were washed twice with phosphate-buffered saline
and homogenized with 50 mM PBS (pH 7.5) buffer containing
1.0 % Triton X-100 and 0.1 mM PMSF. Intracellular
tyrosinase activity was monitored as follows: Cell
extracts (100 μL) were mixed with freshly prepared
L-DOPA solution (0.1% in phosphate-buffered saline)
and incubated at 37°C. The absorbance at 490 nm was
measured with microplate reader Gen 5TM (BIO-TEK Instrument,
Bermont, USA) to monitor the production of
dopachrome, corrected for auto-oxidation of L-DOPA.

結果 (繁體中文) 1:

B16F10 細胞內酪氨酸酶活性的測定細胞的酪氨酸酶活性測定，所述以前 [34] 稍做修改。簡單地說，細胞患者 α-MSH (100 nM) 為 24 小時，然後治療後測定胞內酪氨酸酶活性以不同濃度的 M.廣玉蘭花提取物 (終濃度 10，15，20%; v/v) 或熊果苷 (2.0 毫米) 為 24 小時。之後這些治療方法，兩次與磷酸鹽緩衝液洗細胞和勻漿含 50 毫米 PBS (pH 7.5) 緩衝區1.0%Triton X 100 和 0.1 毫米 PMSF。胞內酪氨酸酶活性進行了監測，如下所示: 儲存格提取 (100 μ L) 混合在一起準備的新鮮左旋多巴 (0.1%溶液在磷酸鹽緩衝液及孵化在 37 ° c。吸光率，490 nm 是用酶標儀 Gen 5TM 測量 (生物 TEK 儀，Bermont，美國) 監測生產多巴色素，更正為自動氧化的左旋多巴。

結果 (繁體中文) 2:

B16F10胞內酪氨酸酶活性的測定法
的細胞的酪氨酸酶的活性如所描述確定
先前[34]有輕微的修改。簡言之，將細胞
分別用α-MSH（100納米）24小時處理，然後
細胞內的酪氨酸酶的活性治療後測量
用各種濃度的分枝玉蘭L.
花提取物（最終濃度10，15，20％;體積/ v）或
熊果苷（2.0毫摩爾）24小時。這些處理後，將
細胞用磷酸鹽緩衝鹽水洗滌兩次
，並勻化用50mM的PBS（pH7.5）中含有緩衝液
1.0％的Triton X-100和0.1mM PMSF。細胞內的
酪氨酸酶的活性監測如下：細胞
提取物（100μL）中混合新鮮製備
的L-DOPA溶液（在磷酸鹽緩衝鹽水0.1％）
並在37℃。490nm處的吸光度
測定用酶標儀根5TM（BIO-TEK儀器
，Bermont，美國），以監控生產的
多巴色素，用於自動氧化的L-DOPA的校正。

結果 (繁體中文) 3:

確定為描述
以前[ 34 ]稍作修改了B16F10細胞內酪氨酸酶的活性
細胞酪氨酸酶活性測定。簡單的細胞，
與αMSH（100 nm）處理24 h，用不同濃度的廣玉蘭屬
花提取物治療後再

量測細胞內酪氨酸酶的活性（終濃度為10，15，20%；V / V）或
熊果苷（2毫米）24 h處理後，細胞的
用磷酸鹽緩衝鹽水
和均質50毫米的PBS洗兩次（pH 7.5）中含有
1% Triton X-100和0.1毫米PMSF緩衝。細胞內酪氨酸酶的活性
監測如下：細胞
提取物（100μL）混合新鮮製備的
左旋多巴溶液（0.1%的磷酸鹽緩衝生理鹽水）
孵育在37°C.在490 nm處的吸光度是
用酶標儀創5tm（寶特儀器量測，
柏蒙特，美國）監測
多巴色素的生產，對左旋多巴的自動氧化校正。