Embryos were removed from the RNAla

Embryos were removed from the RNAlater solution in minimal volume using a finely drawn mouth pipette, washed in PBS + 4% Tween20 (Sigma Chemical Co.), and placed into 10 μL of RNAGEM solution (ZyGEM NZ Ltd., Hamilton, New Zealand) for complete cell lysis, incubated at 75°C for 5 min, then immediately placed on ice. The DNA was removed with DNase I treatment at 37°C for 5 min, with inactivation of enzyme at 75°C for 5 min, followed by placing the sample on ice. Total RNA was then converted to cDNA using 20% vol/vol Superscript VILO MasterMix (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA) according to the manufacturer’s instructions (mix and incubate at 25°C for 10 min, incubate at 42°C for 120 min for increased yields of cDNA, and terminate the reaction at 85°C for 5 min).

結果 (繁體中文) 1:

胚胎從在使用精拉口移液管，在PBS + 4％吐溫20（Sigma化學公司）洗滌最小體積的RNAlater中溶液中取出，並放入10的RNAGEM溶液μL（ZyGEM NZ有限公司，漢密爾頓，新西蘭）對於完整細胞裂解，在75℃下溫育5分鐘，然後立即置於冰上。將DNA用DNase I處理在37℃下在75℃除去5分鐘，用酶的失活5分鐘，然後將樣品置於冰上。然後總RNA使用轉化為cDNA 20％體積/體積的Superscript VILO主混合物依照生產商的說明書（Invitrogen，賽默飛世爾科技，沃爾瑟姆，MA）（混合，並在25℃下10分鐘，孵育42℃溫育120分鐘增加cDNA的產率，並終止在85℃5分鐘的反應）。

結果 (繁體中文) 2:

胚胎從RNAlater溶液中以最小體積使用精細繪製的口腔移液器，在PBS = 4% Tween20（西格瑪化學公司）中洗滌，並放入10μL的RNAGEM溶液（ZyGEM NZ Ltd.，紐西蘭，紐西蘭），進行完整的細胞解片，在75°C孵育5分鐘，然後立即放在冰上。通過DNase I在37°C下處理5分鐘，在75°C下停止酶5分鐘，然後將樣品放在冰上，從而去除DNA。然後，根據製造商的說明（在25°C下混合和孵育10分鐘，在42°C孵育120分鐘，提高cDNA產量，並在85°C終止反應5分鐘），將總RNA轉換為cDNA。

結果 (繁體中文) 3:

將胚胎從rnaater溶液中以最小體積取出，使用細拉口吸管，在PBS+4%吐溫20（Sigma Chemical Co.）中洗滌，放入10μL RNAGEM溶液（ZyGEM NZ Ltd.，Hamilton，New Zealand）中進行完全細胞溶解，在75℃下孵育5分鐘，然後立即放在冰上。在37℃下用DNaseⅠ處理5min，在75℃下酶失活5min，然後將樣品置於冰上。然後，根據製造商的說明，使用20%vol/vol上標VILO MasterMix（Invitrogen，Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA）將總RNA轉化為cDNA（在25℃下混合培養10分鐘，在42℃下培養120分鐘，以提高cDNA的產量，並在85℃下終止反應5分鐘）。