Collection of Milk Somatic Cells an

Collection of Milk Somatic Cells and Blood Leukocytes for Gene ExpressionFifty milliliters of milk was collected from each gland at 0, 4, 8, 12, 24, 36, 48, and 72 h relative to the challenge for analysis of gene expression in milk somatic cells. The milk samples collected at 12-h intervals were collected before normal milking. An additional 50 mL of milk was collected at 0 and 8 h for analysis and separation of macrophages and neutrophils. Milk samples were collected into 50-mL conical tubes before full milk withdrawal and transported to the laboratory on ice. Samples were centrifuged at 1,500 × g for 20 min to pellet the cells. The cell pellet was then resuspended in 10 mL of PBS and centrifuged again to wash the somatic cells. The cells were placed in Trizol Reagent (Life Technologies, Carlsbad, CA) and stored at −80°C for later RNA isolation. Blood was sampled from coccygeal vessels into 8-mL lithium heparin evacuated tubes (Vacutainer, Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ) at 0 and 8 h relative to the treatment for isolation of monocytes and neutrophils.

結果 (繁體中文) 1:

牛奶體細胞和血液中的白細胞的基因表達的集合

相對的牛奶五十毫升從各壓蓋在0收集，4，8，12，24，36，48，和72小時的挑戰在牛奶體細胞基因表達的分析細胞。

在12小時的間隔採集的牛奶樣品正常擠奶前收集。

額外的50毫升的牛奶在用於分析和巨噬細胞和中性粒細胞的分離0和8小時進行收集。

牛奶樣品收集到50毫升錐形管中之前充分牛奶撤出並輸送到在冰上的實驗室。

將樣品在1500×離心g下20分鐘以沉澱細胞。

將細胞沉澱再懸浮於10毫升的PBS中並再次離心來洗滌體細胞。

將細胞置於在Trizol試劑（Life Technologies公司，卡爾斯巴德，CA）和儲存在-80℃下用於以後的RNA分離。

血從尾骨船隻在相對於治療單核細胞和中性粒細胞的隔離0和8小時取樣到8毫升肝素鋰真空管（真空採血管，Becton Dickinson公司，富蘭克林湖，新澤西州）。

結果 (繁體中文) 2:

用於基因表達的乳汁細胞和血白細胞的收集

在0、4、8、12、24、36、48和72小時時，從每個腺體中收集了50毫升牛奶，這與分析乳體細胞中基因表達的挑戰有關。

以12小時間隔收集的牛奶樣本在正常擠奶前收集。

在0和8小時額外收集50mL的牛奶，用於巨噬細胞和嗜中性粒細胞的分析與分離。

牛奶樣本在完全取奶前被收集到50mL錐形管中，然後用冰塊運送到實驗室。

樣品在1，500 μg下離心20分鐘，以顆粒細胞。

然後，細胞顆粒被重新懸浮在10 mL的PBS中，然後再次離心以洗滌體細胞。

這些細胞被放置在Trizol試劑（生命技術，卡爾斯巴德，加利福尼亞州），並儲存在+80°C，以用於以後的RNA分離。

在0和8小時，在0和8小時，在單核細胞和嗜中性粒細胞分離治療中，從血囊血管中取樣到8mL鋰肝素抽管（Vacutainer、Becton Dickinson、佛蘭克林湖、新澤西州）。

結果 (繁體中文) 3:

乳體細胞和白細胞的基因表達
在0、4、8、12、24、36、48和72小時從每個腺體收集50毫升牛奶，與分析牛奶體細胞中基因表達的挑戰相關。
每隔12小時採集一次乳樣，在正常擠奶前採集。
在0和8小時收集額外的50毫升牛奶，用於分析和分離巨噬細胞和中性粒細胞。
在全脂牛奶選取前，將牛奶樣本收集到50毫升錐形管中，並用冰塊運送到實驗室。
樣品在1500×g下離心20分鐘，使細胞顆粒化。
然後將細胞顆粒重新懸浮在10毫升PBS中，再次離心洗滌體細胞。
將細胞置於Trizol試劑（Life Technologies，Carlsbad，CA）中，並在-80°C下保存，以便稍後分離RNA。
在與單核細胞和中性粒細胞分離治療相關的0小時和8小時，從尾骨血管中採集血液到8毫升鋰肝素真空管（Vacutainer、Becton Dickinson、Franklin Lakes、NJ）。