Assay of B16F10 intracellular tyros

Assay of B16F10 intracellular tyrosinase activity Cellular tyrosinase activity was determined as described previously [34] with slight modifications. Briefly, the cells
were treated with α-MSH (100 nM) for 24 h, and then intracellular tyrosinase activity was measured after treatment with various concentrations of M. grandiflora L.
flower extract (final concentration 10, 15, 20%; v/v) or arbutin (2.0 mM) for 24 h. After these treatments, the cells were washed twice with phosphate-buffered saline
and homogenized with 50 mM PBS (pH 7.5) buffer containing 1.0 % Triton X-100 and 0.1 mM PMSF. Intracellular tyrosinase activity was monitored as follows: Cell extracts (100 μL) were mixed with freshly prepared L-DOPA solution (0.1% in phosphate-buffered saline)
and incubated at 37°C. The absorbance at 490 nm was measured with microplate reader Gen 5TM (BIO-TEK Instrument,Bermont, USA) to monitor the production of dopachrome, corrected for auto-oxidation of L-DOPA.

結果 (韓文) 1:

앞에서 설명한 B16F10 세포 tyrosinase 활동 세포 tyrosinase 활동의 분석 결과 결정 했다 [34] 약간의 수정. 간단히, 셀α-MSH로 치료 했다 (100 nM) 24 시간, 그리고 다음 세포내 tyrosinase 활동 M. grandiflora L.의 다양 한 농도와 치료 후 측정 했다꽃 추출 물 (최종 농도 10, 15, 20%, v/v) 또는 24 h에 대 한 알 부 틴 (2.0 m m). 이러한 치료 후 셀 인산 염 버퍼 식 염 수로 두 번 씻 겨 했다그리고 1.0% 트라이 톤 X-100와 0.1 밀리미터 PMSF 들어 50 m m PBS (pH 7.5) 버퍼와 무 균. 세포내 tyrosinase 활동 같이 모니터링 했습니다: 셀 추출 물 (100 μ) 갓된 l 아미노산의 일종 솔루션 인산 염 버퍼 염 (0.1%)와 혼합 했다고 37 ° c.에서 incubated 490에서 흡 광도 nm microplate 리더 겐 5TM로 측정 되었다 (바이오-TEK 악기, Bermont, 미국) l 아미노산의 일종의 자동 산화에 대 한 수정 dopachrome의 생산을 모니터링.

結果 (韓文) 2:

이전 [34] 약간의 수정 된 바와 같이 B16F10 세포 내 티로시나 아제 활성 셀룰러 티로시나제 활성의 분석을 측정 하였다. 간략하게, 세포를
24 시간 동안 α-MSH (100 ㎚)로 처리 한 후, 세포 내 티로시나 아제 활성은 M. grandiflora의 L.를 다양한 농도로 처리 한 후에 측정 하였다
꽃 추출물 (최종 농도 10, 15, 20 % V / V) 또는 알부틴 (2.0 mM)을 24 시간 동안. 이러한 치료 후 세포를 인산 완충 식염수로 두 번 세척하고
, 50 mM의 PBS (PH 7.5) 1.0 % 트리톤 X-100, 0.1 mM의 PMSF을 포함하는 완충액으로 균질화. 다음 세포 내 티로시나 아제의 활성을 측정 하였다 : 세포 추출물 (100 μL)을 새로 제조 된 L-DOPA 용액 (인산 완충 식염수, 0.1 %)을 혼합하고
37 ° C에서 배양 하였다. 490 nm에서의 흡광도는 L-DOPA의 자동 산화 보정 도파 크롬의 생성을 모니터링하기 위해 마이크로 플레이트 리더 겐 5TM (BIO-TEK 악기 Bermont, USA)로 측정 하였다.

結果 (韓文) 3:

검색 안에 타이로시나아제 우울하다 확실히 세포 타이로시나아제 서술한 바와 같이 [34] 약간 수정.간단한, 세포환자 α - + (100%), 그리고 24시간 안에 타이로시나아제 후 각 농도 측정 치료 태산목.꽃 추출 (마지막 농도 10 ~ 20% (v) 또는 알부틴 (2.0 mm) 이 24h 처리 후, 두 번 세포 인산 완충 씻다, 골고루 ph 7.5) (50 ~ 완충, 0% 1 mm - 100 효소.모니터 안에 타이로시나아제 다음과 같습니다: 동포 (100 μ l) 가입 (0.1% l - 풀 새로 만든 인산 완충)결코 부화. 4시 곳 ° 흡수 쓰는 보드 독자 상처 5tm (bio-tek 문서, bermont, 미국) 을 감독 생산 도파 색소, 자동차 산화 - 것이야.