The protein was eluted using 400 m

The protein was eluted using 400 m M imidazole in the same
buffer and dialysed against buffer C (25 m M CHES, p H 9.2, 50 m M Na Cl and
2 m M EDTA) to remove imidazole. After dialysis, the sample was subjected to
ion-exchange purification using the Hi Trap Q HP (1 ml) column (GE Healthcare)
in buffer C with added 0.48 m M foscholine-14. The protein was eluted using a Na Cl
gradient (0.05–1.00 M in 20 ml). Finally, the protein was further separated by size
exclusion using the Superdex 200 10/300 GL column (GE Healthcare) in buffer
D (20 m M MES, p H 6.4, 75 m M Na Cl, 0.48 m M foscholine-14, 0.3 m M Na N
3
, and
2 m M EDTA). The elution peak fractions were analysed by SDS–PAGE (Extended
Data Fig. 2) and pooled and concentrated to achieve 0.8 m M c MCU-
Δ
NTD (mon-
omer) for NMR measurements. The final NMR sample buffer contains 20 m M
MES, p H 6.4, 75 m M Na Cl,
~
27 m M foscholine-14, 0.3 m M Na N
3
, 2 m M EDTA
and 5% D
2
O. Typical final yields of c MCU-
Δ
NTD were 2–3 mg of protein from
1 l of cell culture.

結果 (中文) 1:

这种蛋白洗脱使用 400 m M 咪唑在同一缓冲和透析，对缓冲区 C (25 m M 棋，p H 9.2，50 m M Na Cl 和2 m M EDTA) 要删除咪唑。经过透析，遭受了样品离子交换净化使用喜陷阱 Q HP （1 毫升） 列 (Ge)在缓冲区 C 添加 0.48 m M foscholine-14。这种蛋白洗脱使用 Na Cl梯度 (0.05-1.00 M 在 20 毫升)。最后，按大小进一步分离蛋白质排斥在缓冲区中使用 Superdex 200 10/300 GL 列 (Ge)D (20 m p H 6.4，75 m M Na Cl M MES 0.48 m M foscholine-14，0.3 m M Na N3和2 m M 乙二胺四乙酸）。采用 SDS-PAGE （扩展洗脱峰组分进行分析数据图 2） 和汇集，集中实现 0.8 m M c 单片机-ΔNTD （星期一-奥马尔） 核磁共振测量。在最后的核磁共振样品缓冲区中包含 20 m MMES，p H 6.4，75 m M Na Cl，~0.3 m M Na N 27 m M foscholine 1432 m M 乙二胺四乙酸5%D2O.典型最终收益率的 c 单片机-ΔNTD 是蛋白质的 2 — — 3 毫克从细胞培养的 1 升。

結果 (中文) 2:

蛋白质是用在同一个400米1M咪唑洗脱
缓冲液和透析缓冲液C（25 M M CHES，P H 9.2 50 M M的Na Cl和
2米摩尔EDTA）去除咪唑。透析后，将样品进行
使用您好陷阱Q HP（1毫升）柱（GE Healthcare）离子交换纯化
中的缓冲液C以加入0.48 M M foscholine-14。该蛋白质是使用钠氯洗脱
梯度（0.05-1.00 M在20ml）中。最后，将蛋白质进一步通过尺寸分离
使用在缓冲液中的Superdex 200 10/300 GL柱（GE Healthcare）排阻
ð（20 M M MES，P H 6.4，75 M M的Na氯，0.48mmol M M foscholine-14，0.3 M M娜ñ
3
，和
2米摩尔EDTA）。洗脱峰的级分通过SDS-PAGE分析（扩展
数据图2）和汇集并浓缩，达到0.8米M C MCU-
Δ
NTD（季风
奥马尔）用于NMR测量。最后NMR样品缓冲液含有20 M M
MES，P H 6.4，75 M M钠氯，
〜
27日M M foscholine-14，0.3 M M娜ñ
3
，2 M M EDTA
和5％D
2
O. 章C MCU-典型的最终收益率
Δ
NTD分别为2-3毫克的蛋白质从
1升细胞培养。

結果 (中文) 3:

蛋白质洗脱采用400 m m咪唑在同一缓冲液和透析缓冲C（25 m m CHES，p H 9.2、50米的M Na Cl和2 M EDTA）去除咪唑。透析后，样品进行离子交换净化使用的高陷阱Q值惠普（1毫升）列（通用电气医疗保健）在缓冲液中加入0.48 foscholine-14 C M M。使用Na Cl洗脱的蛋白质梯度（0.05，1米，20毫升）。最后，蛋白质进一步分离的大小排除使用Superdex 200 10 / 300 GL柱（GE医疗）在缓冲区D（20 m m，p H 6.4，75米的M Na Cl、0.48 m 0.3 m foscholine-14，na三，和2米的M EDTA）。SDS洗脱峰组分进行了分析（扩展数据图2）并汇集和集中，实现0.8米的C单片机—Δ新台币（Mon—Omer）核磁共振测量。最终的核磁共振样品缓冲液中含有20米MES，p H 6.4、75米的M Na Cl，~27 m 0.3 m foscholine-14，na三M EDTA，2米5% D二C单片机的典型最终产量—Δ新台币2–3毫克蛋白细胞培养1 L。