The return of CtIP to measurable le

The return of CtIP to measurable levels by proteasome inhibition permitted further characterization of the protein in the absence of the Mre11 C terminus. We used phage lambda phosphatase to analyze the phosphorylation status of CtIP in normally dividing cells. In con¬trol cells, most detectable CtIP was phosphorylated, and proteasome inhibition had no detectable effect (Fig. 2b). By contrast, CtIP was clearly hypophosphorylated in the absence of MRN (Mre11−/−) or of the Mre11 C terminus (Mre11ATLD1). Because CDK-dependent phosphorylation of CtIP is required for interaction with BRCA1 (refs. 19,20,24), we carried out coimmunoprecipitation experiments to assess CtIP-BRCA1 interaction in cells lacking the Mre11 C terminus. Indeed, BRCA1-CtIP interaction is disrupted when MRN is deficient (Mre11−/−), or in the context of Mre11ATLD1 (Fig. 2c).

結果 (繁體中文) 1:

CtIP 回到蛋白酶體抑制可衡量水準進一步允許表徵蛋白質 Mre11 C 總站缺席。我們用於噬菌體 lambda 磷酸酶在正常分裂的細胞分析 CtIP 的磷酸化狀態。在 con¬trol 細胞中最檢出 CtIP 被磷酸化，和蛋白酶體抑制了沒有可察覺的影響 (圖 2b)。相比之下，CtIP 顯然是在缺席的 MRN (Mre11−/−) 或 Mre11 C 總站 (Mre11ATLD1) 的 hypophosphorylated。因為依賴蛋白激酶的磷酸化的 CtIP 是必需的 BRCA1 與互動 (refs。 19,20,24)，我們進行了 coimmunoprecipitation 實驗以評估 CtIP brca1 基因相互作用在細胞缺乏 Mre11 C 總站。確實，brca1 基因 CtIP 的相互作用擾亂當 MRN 不足時 (Mre11−/−)，或 Mre11ATLD1 的上下文中 (圖 2c)。

結果 (繁體中文) 2:

CtIP的蛋白酶體抑制返回到可測量水平允許的蛋白質的進一步表徵在​​不存在MRE11 C端。我們使用λ噬菌體磷酸酶來分析在正常分裂細胞CtIP的磷酸化狀態。在con¬trol細胞中，大部分可檢測CtIP被磷酸化，和蛋白酶抑制沒有可檢測的效應（圖2b）。相比之下，CtIP顯然低磷酸在沒有MRN的MRE11 C端（Mre11ATLD1）或（MRE11 - / - ）。因為CtIP的CDK依賴性磷酸化需要與BRCA1（參。19,20,24）相互作用，我們進行了免疫共沉澱實驗，以評估在細胞缺乏的MRE11 C末端CtIP-BRCA1基因相互作用。事實上，當MRN不足的BRCA1 CtIP相互作用被破壞（MRE11 - / - ），或在Mre11ATLD1（圖2c中。）的範圍內。

結果 (繁體中文) 3:

返回的CTIP可衡量的水准抑制蛋白酶體的允許在C末端缺失Mre11蛋白的進一步研究。我們用λ噬菌體磷酸酶對正常細胞分裂的CTIP的磷酸化狀態。CON¬控制細胞，最檢測CtIP被磷酸化，並抑制蛋白酶體活性無明顯影響（圖2B）。對比，CTIP顯然是hypophosphorylated在MRN缺失（MRE11−/−）或Mre11 C端（mre11atld1）。因為CtIP CDK依賴的磷酸化是互動與BRCA1的要求（參。19,20,24），我們進行了免疫共沉澱實驗來評估缺乏MRE11 C末端細胞ctip-brca1互動。確實BRCA1相互作用被破壞時CtIP MRN不足（MRE11−/−），或在mre11atld1上下文（圖2C）。